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数字PCR方案介绍

传统的荧光定量PCR,经过多年的发展,已是很成熟的实验方案了。其中,最常用的是Taqman法和SYBR Green法。而在这二种方法当中,Taqman法又以其特异性高、定量精确,得到广大用户的认可。

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但是Taqman法PCR,它还是一个相对定量的办法。它测的是一个Ct值,也就是PCR到第几个循环,荧光强度达到了一个设定值。


要想用Taqman方法得到:样本中到底有几个目标基因的拷贝,那么还是要再做一个标准品的(qPCR)曲线。才能知道样本的Ct值落在标准曲线的哪个位置上。再进一步推算出样本中的拷贝数量。


这样做,它首先要做一个标准曲线,那么,当然它就增加了工作量。另一方面,因为引入了标准品,而标准品也多少是有一定误差的。所以,实验中又多引入了一个实验的误差变量。


科学家为了克服传统定量PCR的上述两个弱点,那么又新发明了微滴数字PCR。


微滴数字PCR的原理,就是把原来一整管的PCR反应液,分散成几万个,甚至几百万个极微小的液滴。这些小微滴同时进行PCR反应,这样就可以计算出原来的反应液当中,有多少个目标基因的拷贝了。


了解了原理之后,我们来看看商业公司的实现方案。其中Bio-Rad公司和RainDance公司采用了油包水PCR的方法,用油把PCR反应液分隔成等体积的小液滴,再进行PCR反应。Life公司采用了芯片的方法,在芯片上预制了2万个小孔,把PCR反应液,物理地注入到芯片上的小孔中,密封后,进行PCR反应。


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