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中国科研工作者对抗体试剂问题的反思

2015年5月19日 Nature杂志从美国和加拿大几位资深科学家的亲身经历,深度阐述了目前抗体试剂的现状与问题,给全世界科研工作者敲响了警钟。身为中国科研工作者,我们遇到的抗体试剂问题只怕比国外同行来得更多,当下除了抱怨,我们更应深刻反思:如何才能获得高质量、合适的抗体试剂。

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获得高质量、合适的抗体试剂也并非难事,我们需要在以下三个方面加以甄别:1.优秀的抗体供应商;2.过硬的冷链物流体系;3.正规的销售(直销/分销)渠道。


1. 优秀的抗体供应商


优秀的抗体供应商应具备以下条件或者能为客户提供以下信息:抗原序列选择、抗体纯化方式、抗体验证数据、应用指南。


i. 抗原序列选择


抗原序列选择至关重要,直接决定了抗体的特异性/低交叉反应和抗体产量,因此抗原序列选择不仅要保证全基因组内同源序列最低,同时还要排除信号肽和蛋白跨膜区序列。


ii. 抗体纯化


抗体纯化目前主流的三种方式分别是:盐析法粗纯、Protein A/G通用型纯化和特异抗原纯化柱,三种方式的纯化效果和抗体效价依次提高。其中Protein A/G通用型纯化的效果和成本适中,目前大部分抗体试剂公司都采用该方式进行大规模抗体生产。要想获得较高质量的抗体,需要通过特异抗原纯化柱,但由于涉及固定特异抗原等操作,成本相应是最高的,然而,使用该方法纯化出来的抗体纯度和特异性最高。


iii. 抗体验证数据


目前很多供应商都有抗体验证数据,但我们并不知道这些验证数据的具体来源。很多抗体都有WB验证数据,但很少有供应商标明WB是在哪些细胞系内验证,如果是过表达的细胞系,那WB验证意义就不大了。同样,免疫组化或免疫荧光也存在类似问题,验证的数据具体来源于哪种组织、哪种病理样本鲜有提及。而来源不同,实验结果会千差万别。供应商往往用一种最容易得到实验室数据的样本做实验,但这样的抗体用到我们自己的实验时,往往会有多种问题出现。


iv. 应用指南


抗体供应商一般会根据验证数据推荐相关的应用,所以验证数据对于应用有决定性作用。应该特别注意,同一支抗体可以做WB,却并不一定适合于免疫荧光或免疫组化,反之亦然。因此,供应商的抗体验证数据就显得非常重要了。


以上列出了优秀抗体供应商的4条硬性要求,现实中有哪些能很好地做到以上几点呢?下面以Sigma-Aldrich提供的HPA金标抗体为例。HPA金标抗体由Human Protein Atlas (HPA)Project设计并验证。


1)HPA金标抗体抗原选择


HPA金标抗体的免疫抗原是重组人蛋白表位识别标签(PrESTs),表位识别标签一般含有50-150个氨基酸。表位识别标签经过设计和筛选,使得它们含有独特的表位,并且适合激发高特异性的抗体产生。通过对人全基因组扫描的方式,确保用于生产抗体的蛋白表位识别标签与其它蛋白有最低的同源性。同时,抗原表位还会排除信号肽和蛋白跨膜区。


2)HPA金标抗体亲和层析纯化


HPA金标抗体通过亲和层析方式进行纯化(以PrESTs抗原作为配基,特异抗原纯化柱),采用三步法免疫层析的纯化工艺:HisABP特异性标签去除,PrESTs特异性捕获,最后通过排阻色谱进行缓冲液的交换,不仅保证了抗体的纯度,同时有利于抗体长期保存。


3)HPA金标抗体验证


每一支HPA金标抗体都经过蛋白芯片、免疫组化、WB和免疫荧光的实验验证,验证的数据量不仅巨大--每支抗体超过700张实验验证图片(病理学家认证并注释)在线查询,而且,验证数据是来自于不同组织和细胞系样本,还会结合参考文献以及生物信息学预测,确保每一个实验数据的可靠性。


4)HPA金标抗体应用指南


HPA金标抗体主要以免疫组化/免疫荧光为主,大部分抗体同时支持WB实验。基于多种组织或者细胞的验证结果,给广大科研工作者提供了宝贵的数据参考。


综上,HPA金标抗体可称得上是优质抗体典范,而Sigma-Aldrich算是优秀的抗体供应商之一。


2. 过硬的冷链物流体系


目前冷链物流体系已经非常成熟,各家供应商一般都能保证抗体的低温运输。对于供应商而言,主要是舍得投入,这一点做得比较突出的有Sigma-Aldrich,抗体收到后,一般冰盒还能坚持2-3天,足以让使用者安心实验。


3. 正规的销售(直销/分销)渠道


在国内,销售渠道是问题突出的关键环节,尤以假抗体试剂为甚,很多产品在包装上其实是可以辨别的(科研工作者很少关注,往往以价格为导向)。在利益的驱使下,部分经销商经常会自己制作抗体试剂,贴上假冒标签以次充好;另一个很普遍的现象是从正规渠道购得抗体试剂,通过小作坊稀释分装后,再出售给科研工作者。


无论是以次充好,还是稀释分装,都会给科研工作者都带来很多实验风险,最后买单的始终是广大中国科研工作者,不仅耗费金钱和人力,更难以弥补的是宝贵的时间成本。


因此在购买渠道上,建议大家尽量从官方指定经销商处购买抗体试剂,抑制假货的流通。同时,随着电子商务平台的成熟,大家可以直接在各大官方网站订购试剂,这是最安全便捷的购买渠道。关于这点,免不了再次提及Sigma-Aldrich,Sigma-Aldrich是国内最早实行电子商务的生命科学产品供应商,并且以直销为主导,避免了中间流通环节的问题,加上其强大的物流体系,很大程度上降低了销售环节可能带来的实验风险。


面对纷繁复杂的抗体市场,建议大家购买抗体试剂时谨慎选择,切勿贪图小利,通过正规销售渠道购买优秀供应商的抗体,最大限度降低因抗体质量问题给我们带来的损失


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