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细菌单染色法及口腔微生物的观察

一、实验目的和内容


目的:巩固无菌操作技术,掌握细菌的涂片和单染色技术,了解口腔中的微生物及其观察方法。

内容:1.学习细菌单染色操作技术。

2. 用单染色法或负染色法观察口腔中的微生物。


二、实验材料和用具


大肠杆菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylocosccus aureus)的斜面菌种。

吕氏美蓝染色液、石炭酸复红染色液、黑色素液或碳素墨水、香柏油、二甲苯、无菌水;

显微镜、擦镜纸、接种环、酒精灯、载玻片、吸水纸、无菌牙签。


三、操作步骤


(一)单染色法

1.涂片  在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴无菌水,用无菌操作方法从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀,涂成薄膜,涂布面积约1~1.5cm2(图7—1A、B)。

2.干燥  将涂片于室温中自然干燥。

3.固定  手扶载片一端,使涂菌的一面向上,将载片通过微火2~3次。在火上固定时,用手摸涂片反面,以不烫手为宜。不能将载片在火上烤,否则细菌形态毁坏(图7—1C)。

4.染色  将涂片置于水平位置,滴加染色液覆盖于涂菌处,染色约2min(图7—1D)

5.水洗  倾去染色液,斜置载片,用自来水的细水流由载片上端流下,不得直接冲在涂菌处,直洗至从载片上流下的水中无染色液的颜色为止(图7—1E)。

6.干燥  自然晾干或用吸水纸轻轻地吸干,注意不要擦掉菌体(图7—1F)。

7.待标本完全干燥后,先用低倍镜和高倍镜观察,将典型部位移至视野中央,再用油镜观察。

 (二)口腔微生物的观察

1.单染色法

(1)在洁净无油腻的载片中央滴一小滴无菌水,用牙签取牙垢少许与水滴充分混匀,涂成薄膜。

(2)将涂片于室温中自然干燥后,按上面单染色法的步骤,进行固定、染色、水洗,干燥后镜检。

2.负染色法

(1)在洁净无油腻的载片的一端滴一小滴无菌水,用牙签取牙垢少许与水滴充分混匀,然后加少许黑色素溶液,充分混匀。

(2)另取一载片将其边缘放在含菌载片的一端,然后推向另一端,则含菌载片上的混合液被推成薄膜。

(3)于室温中自然干燥。

(4)镜检:将光线调亮,先用低倍镜观察,再用高倍镜观察。


四、注意事项


载玻片要洁净无脂,否则菌液涂不开。涂片时,滴水不要过多,挑菌量宜少,菌膜宜薄。


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