行业资讯 > 技术大全 > 生命科学

粗脂肪含量的测定-索氏抽提法

一、实验目的

脂肪广泛存在于许多植物的种子和果实中,测定脂肪的含量可以作为鉴别其品质优劣的一个指标。脂肪含量的测定有很多方法,如抽提法、酸水解法、比重法、折射法、电测和核磁共振法等。目前国内外普遍采用抽提法,其中索氏抽提法(Soxhlet extractor method)是公认的经典方法,也是我国粮油分折首选的标准方法。通过本实验的学习,掌握索氏抽提法测定粗脂肪含量的原理和操作方法。


二、实验原理

本实验采用索氏抽提法中的残余法,即用低沸点有机溶剂(乙醚或石油醚)回流抽提,除去样品中的粗脂肪,以样品与残渣重量之差,计算粗脂肪含量。由于有机溶剂的抽提物中除脂肪外,还或多或少含有游离脂肪酸、甾醇、磷脂、蜡及色素等类脂物质,因而抽提法测定的结果只能是粗脂肪。


三、试剂耗材

1、实验材料

油料作物种子、中速滤纸

                            

2、试剂

无水乙醚或低沸点石油醚(A.R.)


3.仪器

(1)索氏脂肪抽提器(图1)或YG-Ⅱ型油分测定器   

(2)干燥器(直径15-18cm,盛变色硅胶)

(3)不锈钢镊子(长20cm)

(4)培养皿

(5)分析天平(感量0.001g)

(6)称量瓶

(7)恒温水浴

(8)烘箱

(9)样品筛(60 目)


四、操作步骤

1.准备工作

将滤纸切成8cm×8cm,叠成一边不封口的纸包,用硬铅笔编写顺序号,按顺序排列在培养皿中。将盛有滤纸包的培养皿移入105±2℃烘箱中干燥2h,取出放入干燥器中,冷却至室温。按顺序将各滤纸包放人同一称量瓶中称重(记作a)、称量时室内相对湿度必须低于70%。


2.包装和干燥

在上述已称重的滤纸包中装入3g 左右研细的样品,封好包口,放入105±2℃的烘箱中干燥3h,移至干燥器中冷却至室温。按顺序号依次放入称量瓶中称重(记作b)。


3.抽提

将装有样品的滤纸包用长镊子放入抽提筒中,注入一次虹吸量的1.67 倍的无水乙醚,使样品包完全浸没在乙醚中。连接好抽提器各部分,接通冷凝水水流,在恒温水浴中进行抽提,调节水温在70-80℃之间,使冷凝下滴的乙醚成连珠状(120-150 滴/min 或回流7次/h 以上),抽提至抽取筒内的乙醚用滤纸点滴检查无油迹为止(约需6-12h)。抽提完毕后,用长镊子取出滤纸包,在通风处使乙醚挥发(抽提室温以12-25℃为宜)。提取瓶中的乙醚另行回收。


4.称重

待乙醚挥发之后,将滤纸包置于105±2℃烘箱中干燥2h,放入干燥器冷却至恒重为止(记作c)。


五、实验结果

blob.png

式中:

a:称量瓶加滤纸包重(g)

b:称量瓶加滤纸包和烘干样重(g)

c:称量瓶加滤纸包和抽提后烘干残渣重(g)


六、注意事项

(1)测定用样品、抽提器、抽提用有机溶剂都需要进行脱水处理。

这是因为:第一,抽提体系中有水,会使样品中的水溶性物质溶出,导致测定结果偏高;第二,抽提体系中有水,则抽提溶剂易被水饱和(尤其是乙醚,可饱和约2%的水),从而影响抽提效率;第三,样品中有水,抽提溶剂不易渗入细胞组织内部,结果不易将脂肪抽提干净。


(2)试样粗细度要适宜。试样粉末过粗,脂肪不易抽提干净;试样粉末过细,则有可能透过滤纸孔隙随回流溶剂流失,影响测定结果。


(3)索氏抽提法测定脂肪最大的不足是耗时过长,如能将样品先回流1-2 次,然后浸泡在溶剂中过夜,次日再继续抽提,则可明显缩短抽提时间。


(4)YG-Ⅱ型油分测定器容量大,适合于样品较多的选种鉴定工作使用,温度控制在70℃左右,8h 可提取完毕。


(5)必须十分注意乙醚的安全使用。抽提室内严禁有明火存在或用明火加热。乙醚中不得含有过氧化物,保持抽提室内良好通风,以防燃爆。

乙醚中过氧化物的检查方法是:取适量乙醚,加入碘化钾溶液,用力摇动,放置1min,若出现黄色则表明存在过氧化物,应进行处理后方可使用。处理的方法是:将乙醚放入分液漏斗,先以1/5 乙醚量的稀KOH溶液洗涤2-3 次,以除去乙醇;然后用盐酸酸化,加入1/5 乙醚量的FeSO4 或Na2SO3 溶液,振摇,静置,分层后弃去下层水溶液,以除去过氧化物;最后用水洗至中性,用无水CaCl2 或无水Na2SO4 脱水,并进行重蒸馏。


相关阅读:

Science:抵抗细菌侵犯的神器——皮肤下的脂肪细胞

Mol Metab:警惕孕期高脂肪饮食危害胎儿造血干细胞

Nature子刊:脂肪细胞“白色”变“棕色”,吃药减肥也许不远了!

Cell:褐色脂肪组织中枢调节机制为肥胖症和相关疾病治疗提供新策略


热门排行

推荐阅读